蛋白混合物鉴定
通过液质联用技术(LC-MS/MS)对IP、Co-IP、Pull-down等纯化样本中的蛋白混合物进行鉴定,可同时鉴定目的蛋白及其相互作用蛋白,从而构建与目的蛋白的蛋白质相互作用谱。该技术既适用于蛋白混合物的SDS-PAGE分离后经胶内酶解(in-gel digestion)的质谱分析,也适用蛋白混合物溶液内直接酶解(in-solution digestion)的质谱分析。
蛋白质混合物鉴定的基本原理是蛋白质溶液经过SDS-PAGE分离后经过酶解后形成肽段混合物,肽段混合物经过一维液相色谱或二维液相色谱分离,串联质谱检测,然后通过在相应的数据库中检索,从而鉴定蛋白质。
样本要求:考染胶条。
样本准备:IP样品蛋白混合物鉴定跑SDS-PAGE胶,样品进入分离胶1cm停止电泳,考马斯亮蓝染色,脱色,切胶,将胶用1.5ml Ep管保存。
实验流程
应用领域
IP、Co-IP、Pull-down等蛋白质混合物样品鉴定