焦磷酸测序（Pyrosequencing）

焦磷酸测序技术（Pyrosequencing）作为一种新的序列分析技术，能够快速地检测甲基化的频率，对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测，为甲基化研究提供了新的途径。我公司提供基于QIAGEN公司焦磷酸测序平台的服务。

焦磷酸测序技术原理

       焦磷酸测序技术是由4种酶（DNA 聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶）催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。

       具体过程如下：

1.     仪器向待检测样品中每次只加入一个核苷酸碱基(dNTP) ；

2.       互补的碱基结合在模板上时，会释放出焦磷酸基团Pyrophosphate (PPi) ；

3.       PPi在ATP硫酸化酶(ATP Sulfurylase)作用下，合成ATP，ATP作为能量分子，驱动荧光素在荧光素酶(Luciferase)的催化下转化为氧化荧光素，并发出与ATP能量成正比的荧光信号 ；

4.       信号被CCD数码相机捕捉，形成峰形PyrogramTM；

5.       未与模板结合的碱基将被三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)降解 ；

6.       加入下一种dNTP。

焦磷酸测序实验流程

焦磷酸测序在DNA甲基化中的应用 

2  基因组整体水平的甲基化检测

2  特异位点的甲基化检测

2  寻找新的甲基化位点

焦磷酸测序结果展示

技术优势

1.先进的算法设计可优化最佳的实验条件，内嵌式的质控保证数据的准确可靠，全程的软件控制减少人为因素的影响；

2.灵敏度高，可测到邻近CpG区域的单个甲基化水平，甚至包括测序的引物区域；
3.周期短、通量高，1h内可同时平行分析96个样本，一次运行可实现多个连续CpG位点定量分析；
4.除常规的检测位点变化情况外，还可准确计算频率变化；
5.对于检测位点要求低，可检测未知序列信息，覆盖到人类基因组的所有CpG位点；
6.对于样品要求低，适用于新鲜、冷冻和FFPE样本。