RAP 标签 – 检测和纯化植物蛋白质的新方法

　　在蛋白质的研究过程中，我们往往需要追踪蛋白在细胞内如何移动，或纯化改造后的蛋白。这时，标签(tag)是一种好东西，有助于目标蛋白的检测和纯化。尽管目前已有不少标签，但适用于植物细胞的理想标签并不多。

　　GFP、GUS 和 HaloTag 等蛋白标签作为报告蛋白非常有用，可以检测蛋白质的定位或表达水平。不过，它们比较大，有时会影响目标蛋白的特性。FLAG 和 HA 等肽段标签也常用于植物细胞，但它们有时会表现出低特异性、低亲和力或难以实现蛋白洗脱。

　　日本筑波大学 Kenji Miura 教授领导的研究团队近日在《Frontiers in Plant Science》上介绍了一种新的标签系统，能够检测和纯化植物细胞中的蛋白质。这种方法采用了 RAP 标签来标记蛋白质，随后利用 PMab-2 抗体来识别标签和纯化蛋白。

　　Miura 教授在介绍这种方法时表示：“使用单克隆抗体的免疫亲和层析有着高的亲和力和特异性，这使其成为一种十分强大的工具，特别是在纯化低水平表达的蛋白质时。” 不过，这种方法的主要障碍是试剂费用高昂，尤其是抗体的成本高。

　　为了解决这个问题，Miura 教授及其同事想看看他们是否能在模式植物本氏烟(Nicotiana benthamiana)中生产 PMab-2 抗体。他们不仅成功产生了 PMab-2，并且证明植物产生的 PMab-2 在行为上与 CHO 细胞产生的抗体相似。通过这种方式，他们降低了抗体的生产成本。

　　之后，研究人员测试了 RAP 标签 / PMab-2 亲和纯化方法的可行性。他们在植物细胞中表达了带有 RAP 标签(DMVNPGLEDRIE)的蛋白质，之后发现利用 PMab-2 抗体能够特异性地识别这些带有标签的蛋白。

　　此外，他们还在这些细胞中表达了带有 RAP 标签的重组蛋白以及蛋白复合物，并利用 PMab-2 抗体鉴定。借助 PMab-2 抗体，这些蛋白可从植物细胞中纯化，表明 RAP 标签可用于蛋白质检测以及可溶植物提取物的纯化。

　　Miura 教授解释说：“对于分子生物学而言，植物是极其宝贵的资源。它们可作为生物反应器来生产大量蛋白质，因为它们不大可能碰到细菌和哺乳动物细胞所面临的污染问题。” 他们认为，这种方法有望广泛应用在分子生物学中。(生物通 薄荷)

　　原文检索

　　RAP Tag and PMab-2 Antibody: A Tagging System for Detecting and Purifying Proteins in Plant Cells

　　Front. Plant Sci., 10 September 2020 | https://doi.org/10.3389/fpls.2020.510444